GB 5749-2022核心解读：生活饮用水中大肠埃希氏菌的检测与防控

生活饮用水的微生物安全是保障公众健康的“第一道防线”，GB 5749-2022《生活饮用水卫生标准》作为我国饮水安全的核心准则，明确将大肠埃希氏菌列为常规检验的关键微生物指标。相较于总大肠菌群、菌落总数，大肠埃希氏菌是反映粪便污染最具特异性的“信号菌”，其检测结果直接关系到饮水安全的判定。本文将从标准要求、检测实操、安全意义三个维度，系统解析生活饮用水中大肠埃希氏菌的检测核心要点。

一、标准核心：大肠埃希氏菌的指标定位与意义

GB 5749-2022规定的3项常规微生物指标中，大肠埃希氏菌凭借其对粪便污染的高特异性，成为饮水安全评估的“黄金指标”。要精准理解其检测价值，需先厘清三类微生物指标的差异与关联。

1. 三类常规微生物指标的定位差异

菌落总数是水质清洁度的“基础标尺”，仅反映水体中微生物的总量，用于评价净化工艺效果，无法直接指示污染来源；总大肠菌群包含埃希氏菌属、柠檬酸菌属等4个菌属，虽与粪便污染相关，但部分菌属可在营养丰富的自然水体中存活，存在“非粪便污染检出”的可能，卫生学意义有限；而大肠埃希氏菌作为耐热大肠菌群的核心组成，是人类和动物肠道的特征性菌群，其检出可直接证明水体存在粪便污染，进而提示肠道传染病的传播风险，因此在三类指标中具有最高的预警价值。



2. 大肠埃希氏菌的安全意义：从“指示菌”到“风险预警”

大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）的检测意义，源于其与肠道致病菌的“伴生性”——粪便污染水体时，大肠埃希氏菌会与伤寒杆菌、霍乱弧菌等致病菌同步存在，且其存活能力与致病菌相近，因此可通过检测大肠埃希氏菌间接评估致病菌污染风险。GB 5749-2022明确规定，生活饮用水中大肠埃希氏菌“不应检出”（单位：MPN/100mL或CFU/100mL），这一严格限值为饮水微生物安全划定了“红线”。

需要注意的是，大肠埃希氏菌并非全部致病：多数菌株是人体肠道正常菌群，可合成维生素B、K，与宿主共生；仅致泻性大肠埃希氏菌（如产肠毒素型ETEC、肠出血性EHEC）会引发腹泻、尿路感染等疾病，其中EHEC还可能导致溶血性尿毒综合征等严重并发症，需通过精准检测及时预警。

二、检测实操：从采样到测定的全流程规范

大肠埃希氏菌的检测结果精准性，依赖于“采样-培养-判定”全流程的标准化操作，GB/T 5750.2-2023与GB/T 5750.12-2023为实操提供了权威依据，核心要点集中在采样准备、无菌操作与滤膜法测定三大环节。

1. 采样准备：容器与灭菌的“前置保障”

采样容器的洁净度与无菌性是避免检测误差的关键，需严格遵循“洗涤-灭菌-时效”三重要求。容器选择上，可采用洁净磨口硬质玻璃瓶或聚乙烯瓶（桶/袋），前者适用于实验室常规采样，后者便于现场便携采样。

洗涤流程需“两步到位”：先用自来水加洗涤剂清洗，再用自来水彻底冲净，随后用10%硝酸（或盐酸）浸泡8小时以上，最后用自来水和纯水依次冲洗，彻底去除残留杂质与金属离子；灭菌可采用干热或高压蒸汽两种方式，干热灭菌需在160℃下维持2小时，高压蒸汽灭菌需121℃下维持15分钟，灭菌后若不立即使用，需置于60℃烘箱烘干冷凝水，且灭菌后容器需在2周内使用，避免二次污染。

2. 采样操作：无菌原则与场景适配

采样过程的核心是“无菌操作”，需杜绝外界污染对水样的干扰，不同水源的采样方式存在明确差异。对于自来水水样，需先将水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再放水5分钟（经常用水的水龙头放水1-3分钟），待管道内死水排空后再采集；对于水源水水样，需在距水面10-15cm处采集，确保代表性，采样后在水中盖紧盖子再取出，避免水面漂浮物污染。

此外，采样后需立即送检，全程在0-4℃冷藏保存，且从采集到检验的时间不应超过8小时——大肠埃希氏菌在室温下易繁殖，长时间储存会导致检测结果偏高，失去真实性。

3. 测定核心：滤膜法的“原理与步骤”

GB/T 5750.12-2023推荐采用滤膜法检测大肠埃希氏菌，该方法通过荧光反应实现精准识别，核心依赖NA-MUG培养基的特异性与标准化操作。

① 核心原理

大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸酶，该酶能分解NA-MUG培养基中的荧光底物（4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷），释放出荧光产物。在366nm紫外灯照射下，含大肠埃希氏菌的菌落会产生蓝色荧光，通过荧光观察即可判定阳性结果，这种方法兼具特异性与灵敏度，检出限可达1CFU/100mL。

②  培养基制备

NA-MUG培养基的配方与制备流程直接影响检测效果，需严格把控成分比例与灭菌条件。配方为：蛋白胨5.0g、牛肉浸膏3.0g、琼脂15.0g、MUG 0.1g，加纯水至1000mL。制备时先将成分充分混匀，加热溶解后在121℃下高压蒸汽灭菌15分钟，冷却至50℃左右时倾倒平板，最终pH需控制在6.6-7.0。制备好的平板可在0-4℃冷藏保存2周，超过时效需重新制备。

③ 实验步骤与结果判定

实验需在无菌实验室进行，严格遵循GB 19489的生物安全要求，核心步骤分为接种、培养、判定三步。接种时，将总大肠菌群检测阳性的滤膜（细菌截留面朝上）转移至NA-MUG平板；随后置于36℃±1℃培养箱中培养4小时；培养结束后，在暗处用6W、366nm紫外灯照射平板，若菌落边缘或背面出现蓝色荧光，即为大肠埃希氏菌阳性。

结果计算需采用标准公式：大肠埃希氏菌菌落数（CFU/100mL）=（检出的阳性菌落数×100）/过滤的水样体积（mL）。若未检出阳性菌落，报告为“未检出”；若检出，则需记录具体菌落数，且需满足“不应检出”的标准限值要求。

三、风险防控：从检测到安全保障的延伸

大肠埃希氏菌的检测并非终点，其核心目的是通过污染预警实现风险防控。结合其传播途径与存活特性，可从源头管控、末端消毒两方面构建安全防线。

1. 源头管控：阻断粪便污染路径

大肠埃希氏菌的污染主要源于生活污水、畜禽粪便、农业面源等，需针对性防控：饮用水源地需划定保护区，禁止养殖、排污等活动；城市管网需做好雨污分流，避免暴雨时污水溢流污染水源（如前文所述，暴雨后水源地大肠埃希氏菌浓度可飙升50倍）；农村地区需加强分散式污水处理，避免粪便污水直接排入水源。

2. 末端消毒：杀灭致病菌株的关键

致泻性大肠埃希氏菌等致病菌对高温敏感，80℃热水浸泡5-10分钟或沸水浸泡2-5分钟即可杀灭。对于饮用水，水厂需通过氯消毒、臭氧消毒等工艺确保灭菌效果；家庭饮用时，若怀疑水质受污染，可通过煮沸实现彻底消毒。此外，针对餐饮、食品加工等场景，需定期检测水体大肠埃希氏菌，避免交叉污染。

3. 便捷检测：现场防控的技术支撑

传统实验室检测虽精准，但耗时较长，无法满足现场应急需求。微纳（VVNA）研发的VN-M50便携式微生物检测套件，整合了无菌采样瓶、NA-MUG培养基、小型培养箱等全套设备，将采样、接种、培养流程高度集成，可在现场完成检测，大幅缩短预警时间，适用于水源地巡查、突发污染应急等场景，为微生物安全防控提供了高效工具。

四、结语：以标准化检测守护饮水微生物安全

大肠埃希氏菌的检测是GB 5749-2022微生物安全管控的核心环节，其从采样准备到结果判定的全流程标准化操作，是确保数据精准的关键。理解大肠埃希氏菌的指标意义、掌握规范的检测方法、构建“检测-预警-防控”的闭环体系，不仅是对标准的落地执行，更是对公众健康的直接守护。随着便携式检测技术的发展，未来生活饮用水微生物安全管控将更高效、更精准，为全民饮水安全筑牢“微生物防线”。

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